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采编:哈尔滨家教网   来源:哈工大家教中心   点击:871    发布日期:2014-02-23 01:08:08

建立 DNA文库(基因组文库)的基本方法是什么?

 

答:DNA文库(DNA library)是由一个基因组产生的所有 DNA片段克隆的总称。简单地 说,就是把某一基因组DNA切割成成千上万个片段,把这些片段全部克隆。于是,这些DNA片段的全部克隆含有一个生物体的全部遗传信息。就像人类知识都储存在图书馆中一样。建立DNA文库的基本方法是: (1)纯化载体DNA; (2)用相同的限制性内切酶分别切割载体DNA和基因组DNA,并经蔗糖密度梯度离心纯化切割后的基因组DNA片段,去掉太大或过小的片段; (3)将纯化的基因组 DNA片段与切开的载体 DNA混合并连接,产生的连接混合物用于转化细菌细胞或包装成噬菌体颗粒。让重组噬菌体转染细菌细胞,这样便产生了含有不同重组DNA分子的一群细菌细胞或噬菌体。从理论上讲,几乎所有的这个基因组的DNA都可能存在于这个DNA文库中。以这种方法建立的“DNA图书馆” 叫做基因组文库。每个细菌细胞生长成一个菌落或称一个克隆;每个克隆” 中的细胞含有相同的重组DNA分子。在噬菌体构成的文库” 中,每个重组噬菌体产生一个噬菌斑,即琼脂培养基上细菌草坪” 中细胞被溶解产生的半透明的环斑。在一个噬菌斑中的所有重组噬菌体都是相同的。 


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