1.何谓蛋白质的等电点?其大小和什么有关系?
答:蛋白质是两性电解质,既可与酸,又可与碱相互作用。溶液中蛋白质的带电情况,与它所处环境的pH值有关。调节溶液的pH值,可以使一个蛋白质带正电或带负电或不带电;在某一pH时,蛋白质分子中所带的正电荷数目与负电荷数相等,即静电荷为零,在电场中不移动,此时溶液的p H值即为该种蛋白质的等电点。
蛋白质的等电点主要取决于该蛋白质的氨基酸组成。含碱性氨基酸多的蛋白质其等电点要比含酸性氨基酸多的蛋白质的等电点高(大);此外,蛋白质的解离情况与所处环境的pH值、离子强度、离子的种类等有关.所以蛋白质的等电点不是一个精确的固定值,与测定时所用的缓冲液的性质、pH、离子强度等有关。
2.研究发现,多聚一L-Lys在pH7.0呈随机螺旋结构,但在pH10为a螺旋构象,为什么?预测多聚一L-Glu在什么pH条件下为随机螺旋,在什么pH下为a螺旋构象?为什么?
答:在pH7.0时赖氨酸侧链上的ε氨基带正电荷,它们之间的静电排斥作用阻止了a螺旋的形成。在pH10时,由于接近赖氨酸的等电点,侧链是非质子化的状态,允许a螺旋的形成。对多聚一L-Glu来说,在 pH7.0时,由于侧链羧基都带负电荷,它们之间的静电排斥,将干扰a螺旋的形成,应呈随机螺旋状态,在接近谷氨酸侧链的pK值为4.25~4.0时,因谷氨酸的侧链羟基是非质子化的,应呈螺旋构象。
3. 试比较蛋白质的变性作用与沉淀作用。
答:l)蛋白质的变性作用:蛋白质因受某些物理的或化学的因素的影响,分子的空间构象破坏,从而导致其理化性质,生物学活性改变的现象称为蛋白质的变性作用。强酸,强碱,剧烈搅拌,重金属盐类,有机溶剂,脉,肌类,超声波等都可使蛋白质变性。
2)蛋白质的沉淀作用:由于水化层和双电层的存在,蛋白质溶液是一种稳定的胶体溶液。如果向蛋白质溶液中加入某种电解质,以破坏其颗粒表面的双电层或调节溶液的pH,使其达到等电点,蛋白质颗粒因失去电荷变得不稳定而将沉淀析出。这种由于受到某些因素的影响,蛋白质从溶液中析出的作用称为蛋白质的沉淀作用。
如重金属盐类、有机溶剂、生物碱试剂等都可使蛋白质发生沉淀,且不能用透析等方法除去沉淀剂而使蛋白质重新溶解于原来的溶剂中,这种沉淀作用称为不可逆的沉淀作用。如果向蛋白质溶液中加入大量的盐类,如硫酸铰,蛋白质的溶解度逐渐下降,以致从溶液中沉淀出来,若用透析等方法除去使蛋白质沉淀的因素后,可使蛋白质恢复原来的溶解状态。此种沉淀作用称为可逆的沉淀作用。
沉淀的蛋白质不一定变性失活,但变性后的蛋白质一般失去活性
4.多聚L-Leu肽段在二氧杂环己烷(dioxane)存在时可形成a螺旋结构,但多聚L-Ile不能,为什么?
答:因异亮氨酸的β碳原子上有一甲基,干扰了a螺旋结构的形成。在亮氨酸分子中,甲基位于γ碳原子上,远离主链,不会干扰a螺旋结构的形成。
5. 一次突变,某蛋白质分子内的一个丙氨酸转变为缬氨酸导致该蛋白质生物活性的丢失;然而在另一次突变时,由于一个异亮氨酸转变为甘氨酸而使该蛋白质的活性恢复了,请分析可能的原因是什么?
答:第一次突变时丙氨酸转变成了缬氨酸,因后者的侧链较大,使蛋白质的构象改变;另一次突变后由于异亮氨酸转变为甘氨酸,甘氨酸的侧链较小(和丙氨酸相似),补偿了第一次突变造成的影响。
6. 甘氨酸是蛋白质进化中高度保守的氨基酸残基吗?为什么?
答:甘氨酸是20种氨基酸中侧链最小的一个氨基酸。正因为如此,它的存在使多肽链能形成紧密的盘绕折叠(to make tight turns)或相互靠近。
7. 从蛋白质的一级结构可预测它的高级结构。下面是一段肽链的氨基酸排列顺序:“L-A-H-T-Y-G-P-F-Z(Q)-A-A-M-C-K-W-E-A-Z(Q)-P-D-G-M-E-C-A-F-H-R”,问:
1)你认为此段肽链的何处会出现β转角结构? 2)何处可形成链内(intra-)二硫键?
3)假定上述顺序是一个大的球蛋白分子中的一部分结构,指出D、I、T、A、Z(Q)、K氨基酸残基可能在蛋白质分子的表面还是内部?
答:1)β转角结构很可能出现在7位和19位,即脯氨酸残基处。 2)13位和24位的半肽氨酸之间可能形成二硫键。 3)极性、带电荷的氨基酸如 AsP,Gln,Lys一般在分子的表面,而非极性的氨基酸如Ala,Ile可能在分子内部。苏氨酸尽管有极性,但亲水性指数(hydropathy index)接近零,故它可能在分子表面或分子内。